СХЕМА МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА

 

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: мокрота (трехкратное взятие: утром в присутствии персонала, вечером того же дня, утром следующего дня), гной, моча, СМЖ, промывные воды желудка у детей, плевральная жидкость, кусочки органов, промывные воды бронхов, каловые массы, менструальная кровь

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ: БАКТЕРИОСКОПИЧЕСКИЙ, БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ (ОСНОВНОЙ), БИОЛОГИЧЕСКИЙ, СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ, АЛЛЕРГОЛОГИЧЕСКИЙ, МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИЙ

 

Бактериоскопический метод Бактериологический метод Биологический метод
1. Концентрация микобактерий туберкулеза в исследуемом материале методом седиментации или флотации. 2. Фиксированный препарат, окраска по Граму, микроскопия. 3. Фиксированный препарат, окраска по Цилю-Нильсену, микроскопия. 4. Фиксированный препарат, окраска аурамином, люминесцентная микроскопия, лазерная флюоресценция. I ЭТАП: 1. Посев на питательные среды: Левенштейна-Йенсена, Петраньяни, Финна-II. Инкубация при 37оС в течение 1-3 месяцев, просматривая каждую неделю. II ЭТАП: 1. Изучение характера и скорости роста с определением КОЕ: «+» - 1-20 колоний, «++» - 21-100 колоний, «+++» - 101-200 колоний, «++++» - более 200 колоний. 2. Отбор подозрительных колоний (R-форма). 3. Мазок из подозрительных колоний, окраска по Цилю-Нильсену, микроскопия. 4. Проведение проб на уреазу, каталазу, нитратредуктазу, ниацинового теста (идентификация МБТ и НТМБ). 5. Определение чувствительности к химиопрепаратам методом серийных разведений, ПЦР. III ЭТАП: Учет полученных результатов. Окончательный ответ. (МБТ «Mycobacterium tuberculosis complex»: Mycobacterium tuberculosis, M. bovis, M. africanum, M. microti, M. canettii, M. caprae, M. pinnipedii, M. mungi; НТМБ «нетуберкулезные микобактерии»: Mycobacterium avium complex, M. xenopi, M. kansasii, M. fortuitum и др.). I ЭТАП: Заражение морских свинок в паховую область. Наблюдение 6-10 дней II ЭТАП: 1. Оценка местных изменений: увеличение регионарных лимфатических узлов и образование незаживающей язвы с густым гноем. 2. Мазки из гноя и лимфатических узлов, окраска по Цилю-Нильсену, микроскопия. 3. Эвтаназия, патолого-анатомическое исследование (обнаружение бугорков в лимфатических узлах брюшины и бронхов, в селезенке и почках). 4. Заключение.
Серологический метод Молекулярно-биологический метод
1. РСК 2. РПГА 3. РИА 4. РДП 5. ИФА 6. РИФ 7. РЛА 8. TB-Spot (тест-гребенка) 1. ПЦР. 2. Микробиочипы. 3. ДНК-гибридизация. 4. Рестрикционный анализ. 5. Секвенирование 16S rDNA и ITS – региона МБ. 6. Жидкостная хроматография.
Аллергологический метод
Кожно-аллергическая проба с туберкулином (проба Манту, гамма-интерфероновый тест: IGRA in vitro, и др.), РБТЛ, РТМЛ.

 

 

Ускоренные методы диагностики туберкулеза.

А. Метод микрокультур по Прайсу: I ЭТАП: 1. Мазок из исследуемого материала, высушивание при 37оС 5-10 мин, обработка 6% серной кислотой, нейтрализация раствором едкого натрия, промывание физиологическим раствором. 2. Погружение во флаконы с цитратной кровью в разведении 1:4 – 1:8. Инкубация при 37оС 7-10 дней. II ЭТАП: 1. Окраска мазков по методу Циля-Нильсена. 2. Микроскопия под малым увеличением (микроколонии у вирулентных штаммов имеют вид «жгутов» красного цвета).
Б. Метод с применением автоматических систем BACTEC, MB/BacT

ПРИМЕЧАНИЕ: Для экспериментального заражения и посевов на питательные среды исследуемый материал обрабатывают минеральными кислотами с целью освобождения от посторонней микрофлоры.
21. СХЕМА МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ЛЕПРЫ

 

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: соскоб со слизистой оболочки носа (с обеих сторон перегородки), с поверхности кожи, содержимое лепрозных узлов, мокрота, отделяемое язв, кровь (в период лихорадки).

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ: БАКТЕРИОСКОПИЧЕСКИЙ (ОСНОВНОЙ), БИОЛОГИЧЕСКИЙ, СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ, АЛЛЕРГОЛОГИЧЕСКИЙ, МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИЙ